真空離心濃縮儀在代謝組學(xué)中扮演著關(guān)鍵角色,主要用于樣品前處理階段的溶劑去除和樣品濃縮,其高效、溫和的特性特別適合處理熱不穩(wěn)定或易氧化的代謝物。
1. 樣品制備中的關(guān)鍵應(yīng)用
溶劑去除與濃縮:
代謝組學(xué)樣本(如尿液、血液、組織提取液)常需通過(guò)液相色譜(LC)或氣相色譜(GC)分析,前處理時(shí)需去除提取溶劑(如甲醇、乙腈、水等),濃縮目標(biāo)代謝物。真空離心濃縮儀通過(guò)低溫減壓蒸發(fā),避免高溫破壞熱敏感代謝物(如維生素、多酚、脂質(zhì)等)。
示例:LC-MS分析前,生物樣本經(jīng)有機(jī)溶劑提取后,通過(guò)離心濃縮去除溶劑,提高檢測(cè)靈敏度。
凍干樣本復(fù)溶:
凍干后的代謝物樣本需用特定溶劑復(fù)溶,離心濃縮可精確控制終體積,確保后續(xù)分析(如NMR或MS)的濃度一致性。
2. 技術(shù)優(yōu)勢(shì)
溫和處理:
結(jié)合真空與離心力(通常搭配制冷至-50℃~-80℃),降低溶劑沸點(diǎn),避免高溫導(dǎo)致的代謝物降解(如氧化或水解)。
高通量兼容性:
多通道設(shè)計(jì)可同時(shí)處理數(shù)十個(gè)樣本,適合大規(guī)模代謝組學(xué)研究(如臨床隊(duì)列分析)。
減少氧化風(fēng)險(xiǎn):
密閉真空環(huán)境降低氧敏感代謝物(如硫醇類(lèi)、多不飽和脂肪酸)的氧化損失。
3. 典型工作流程
樣本提取:使用甲醇/乙腈/水混合溶劑從生物樣本中提取代謝物。
離心濃縮:在真空離心濃縮儀中去除有機(jī)溶劑,剩余水相可通過(guò)冷凍干燥進(jìn)一步處理。
衍生化(如需):GC-MS分析前,濃縮后的樣本可能需衍生化(如硅烷化),再次濃縮去除多余試劑。
儀器分析:濃縮后的代謝物溶于適合LC-MS或GC-MS的溶劑中上機(jī)檢測(cè)。
4. 注意事項(xiàng)
揮發(fā)性代謝物損失:短鏈脂肪酸、醛類(lèi)等低沸點(diǎn)化合物可能在濃縮過(guò)程中揮發(fā),需優(yōu)化真空度或改用氮吹濃縮。
交叉污染:高通量運(yùn)行時(shí)需確保轉(zhuǎn)子清潔,避免樣本間殘留。
溶劑選擇:高沸點(diǎn)溶劑(如DMSO)可能難以去除,需結(jié)合后續(xù)步驟優(yōu)化。
5. 與其他技術(shù)的聯(lián)用
與SPE(固相萃?。┞?lián)用:濃縮后的樣本可通過(guò)SPE進(jìn)一步純化,去除鹽分或雜質(zhì)。
與凍干技術(shù)互補(bǔ):水相樣本可先離心濃縮,再凍干去除殘留水分。
真空離心濃縮儀通過(guò)高效、可控的溶劑去除,顯著提升代謝組學(xué)分析的靈敏度和重復(fù)性,尤其適用于復(fù)雜生物樣本中痕量代謝物的制備。其低溫、避氧的特點(diǎn)使其成為代謝組學(xué)(尤其是脂質(zhì)組學(xué)、能量代謝研究)。實(shí)際應(yīng)用中需根據(jù)目標(biāo)代謝物的理化性質(zhì)優(yōu)化參數(shù)(溫度、真空度、離心速度)。
富睿捷真空離心濃縮設(shè)備可同時(shí)處理多個(gè)樣品,無(wú)需擔(dān)心交叉污染。系統(tǒng)內(nèi)程序可設(shè)定至多30個(gè),主機(jī)配備樣品在線(xiàn)成像系統(tǒng),可在運(yùn)行過(guò)程中觀察樣品濃縮狀態(tài),并根據(jù)不同的樣品對(duì)整機(jī)的真空度進(jìn)行調(diào)節(jié)。設(shè)備采用皮拉尼真空計(jì)可實(shí)時(shí)顯示腔體內(nèi)的真空度,并保證真空度的真實(shí)性。根據(jù)不同的樣品可對(duì)整機(jī)轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)節(jié)。
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